Определение антигена p24 ВИЧ

Введение

Хотя анализы на антитела против ВИЧ являются наиболее удобным способом выявления инфекции, существуют и альтернативные технологии, которые пригодны для точной постановки диагноза, позволяют осуществлять мониторинг ответа на лечение и могут использоваться для эффективного прогноза исхода заболевания. Выделение вируса путем культивирования, анализы на вирусную РНК и анализы на антиген p24 могут использоваться для демонстрации наличия вируса или компонентов вируса в крови, что позволяет верифицировать инфекцию. Эти методы являются высоко специфическими, положительные результаты подтверждают наличие инфекции. Каждый из этих методов, однако, имеет ограничения, и их использование должно быть привязано к соответствующим аналитическим потребностям. Недавно были предложены анализы для определения вирусной нуклеиновой кислоты, однако они требуют сложной технологии и хорошо обученного персонала.

Анализ на антигены ВИЧ используется в настоящее время для скрининга крови в службе переливания крови, а также в некоторых других ситуациях. К достоинствам этого анализа относится простота постановки и экономичность, однако, анализ не является абсолютно совершенным.

Анализ на вирусный антиген p24 позволяет определять белок вирусного капсида (core компонент) в крови, причем этот компонент во время острой фазы инфекции обнаруживается раньше, чем антитела против ВИЧ. Антиген p24 появляется в ранние сроки после заражения в результате исходной вспышки репликации вируса, его появление связано с высоким уровнем виремии во время периода, когда степень контагиозности больного очень высока (1). Когда начинают обнаруживаться антитела против ВИЧ, антиген p24 часто уже не выявляется, вероятнее всего в результате образования комплекса между антигеном и антителами в крови. В случаях его обнаружения антиген p24 является высокоспецифическим индикатором инфекции. Специфичность анализа на антиген p24 при выявлении инфекции ВИЧ с использованием ПЦР в качестве "золотого" (проверочного) стандарта, рассчитанная по данным, полученным с помощью наборов двух фирм-производителей, составляет 99,9%(2). В этом же исследовании чувствительность метода после нейтрализации для подтверждения присутствия антигена p24 (см. ниже) составляла 100%.

Анализ на p24 может быть ценным в следующих ситуациях: (1) выявление ВИЧ инфекции на ранних стадиях; (2) скрининг крови; (3) диагностика инфекции у новорожденного (3) и (4) мониторинг антиретровирусной терапии (4). Основным ограничением этого метода является то, что он не чувствителен при анализе крови, поскольку низкие концентрации антигена трудно выявить и поскольку антигенемия наблюдается лишь транзиторно на различных стадиях инфекции (5). По существу, определение антигена ВИЧ не способно обнаружить инфицированных доноров крови в 75% случаев, если они серонегативны (6).

Антиген p24 обнаруживается в сыворотке или в свободной форме, или в комплексе с анти-p24 антителами. Свободный p24 можно определять с помощью иммуноферментных методов, в то время как определение связанного p24 требует предварительной обработки кислотой для диссоциации комплекса. Процедуры для диссоциации комплексов между антигеном и антителами повышают чувствительность определения p24, но антиген остается не обнаружимым у большинства асимптоматических больных (7). Антитела остаются выявляемыми на протяжении всей инфекции, в то время как антиген p24 в типичных случаях выявляется только на ранних и поздних сроках в ходе инфекции.

Определение антигена p24 и других ранних маркеров во время инфекции
[Содержание]

После заражения ВИЧ хронологическая последовательность появления в сыворотке маркеров, идентифицирующих инфекцию, является следующей: вирусная РНК, антиген p24 и антитела против ВИЧ. Примерно через 2 недели после заражения виремия, вероятно, увеличивается экспоненциально, а затем уменьшается до стационарного уровня в результате того, что гуморальный и клеточный иммунный ответ ограничивают репликацию ВИЧ. Этот период времени ("серологически латентный период") характеризуется серонегативностью, эпизодически выявляемой антигенемией, виремией (по данным определения РНК) и вариабельными значениями концентрации CD4+ Т-лимфоцитов. Выявление специфических антител против ВИЧ знаменует собой окончание латентного периода и переводит больного в категорию серопозитивных лиц.

Точный момент времени, когда могут быть выявлены ВИЧ РНК, антиген или антитела, зависит от нескольких факторов, включая использованный метод, индивидуальный ответ организма и характеристики вируса. Вирусная РНК может выявляться в пределах первых двух недель с помощью высокочувствительного метода ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с использованием обратной транскриптазы). Антиген, хотя его присутствие имеет транзиторный характер, может появляться уже через 2 недели после заражения и остается в течение 3-5 месяцев (8). Методы определения антител нового поколения, включая методы с использованием сэндвича антигенов, могут выявлять антитела у большинства лиц приблизительно через 3-4 недели после заражения (9). На поздних стадиях инфекции, а именно на этапе прогрессирования к стадии СПИД, содержание анти-p24 антител снижается, и антиген p24 вновь становится выявляемым (10). Снижение содержания антител к p24, образование антигена, а также формирование иммунных комплексов, вероятнее всего, связаны с изменениями характера репликации вируса (11), поскольку антитела к другим компонентам (например, к гликопротеидам оболочки вируса) присутствуют на всем протяжении инфекции (12).

Итак, когда речь идет о скрининге крови или постановке диагноза, серологически латентный период представляет собой период продолжительностью от 3 до 4 недель, когда наличие ВИЧ инфекции невозможно продемонстрировать с помощью анализов на антитела. Методы, выявляющие антиген p24, могут сократить этот период на одну неделю, хотя при этом выявляются не все серонегативные, но инфицированные ВИЧ лица. Анализы, выявляющие вирусную РНК, могут сократить этот латентный период еще на несколько дней, по сравнению с анализом на антитела и антиген, однако такие определения (определения РНК) в настоящее время непригодны для использования в стандартных лабораториях в связи с необходимостью сложного оборудования и высокой квалификации сотрудников. Соответственно, период после заражения, когда постановка диагноза невозможна, может быть сокращен до 2 недель или менее, если использовать всестороннюю стратегию с применением анализов на антитела, антиген p24, а также методы выявления РНК.

Использование анализа на антиген p24
[Содержание]

В ряде случаев метод определения антигена p24 применяется неправильно. Важно помнить, что анализы на антиген p24 позволяют выявить растворимый антиген p24, являющийся вероятным следствием репликации вируса, но не живой вирус. Поэтому наличие позитивного результата при анализе на антиген не подтверждает, что образец является инфицированным, и метод не должен применяться для этой цели. Единственным способом демонстрации наличия инфекционного вируса в образце является его выделение и культивирование. Отрицательный результат при анализе на антиген не исключает инфекцию, потому что этот анализ недостаточно чувствителен; иными словами, этот тест не следует применять для подтверждения случаев отсутствия инфекции. Выявление антигена говорит об инфекции, и получение положительных результатов у серонегативных лиц может быть эффективным, хотя и не экономичным способом диагностики ранних стадий инфекции.

Анализ на антиген p24 является наиболее ценным для выявления антигена в надосадочных жидкостях культур, которые были засеяны клетками, полученными от больного с подозрением на инфекцию (культивирование и выделение вируса). Определение антигена является предпочтительным методом выявления присутствия свободного антигена в культуре. И этот метод является на два порядка более чувствительным, чем определение обратной транскриптазы (13). Метод является исключительно полезным для выявления вирусного антигена в культуральной жидкости, поскольку во время репликации вируса в надосадочную жидкость выделяются большие количества антигена.

Тест на антиген может выполняться не только на культуральной жидкости и сыворотке, но также и с другими жидкостями. Данные, полученные при испытании спинномозговой жидкости (СМЖ), показывают, что у многих больных с вызванным ВИЧ слабоумием и энцефалопатией СМЖ содержит значительные количества антигена, что вероятнее всего связано с активной репликацией вируса в ткани мозга.

Тест на антиген p24 может быть ценным при скрининге крови, для установления острой инфекции, для мониторинга инфекции, а также в качестве вспомогательного средства диагностики у новорожденных (каждый из этих вопросов обсуждается ниже). Он может использоваться для выявления случаев ранней инфекции после изнасилования, для выявления инфекции после профессиональной экспозиции и как вспомогательный тест в разрешении вопроса о неопределенных результатах, полученных с помощью Вестерн блот анализа. Однако остается неизвестным, в какой степени анализы на антиген p24 могут выявлять антиген из всех кладов вируса, а именно ВИЧ-1, ВИЧ-2 и ВИЧ-1 группы О.